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恒温消解仪在蛋白质测定中的有效应用
点击次数:2058 更新时间:2014-12-16 返回
   凯氏定氮法测定蛋白质的含量,是zui常用的蛋白质测定方法,但样品的消解费事费时,一般一台电炉一天zui多消化两个样品。这里,我们采用恒温消解仪进行蛋白质消解,4~6小时可同时消化16个样品。有效的提高了样品消解的速度。

  下面具体来看恒温消解仪进行蛋白质消解的过程:

  A.称0.2-2.0g固体样品或5-10g液体样品于平底玻璃消化管中,加0.2g硫酸铜,3g硫酸钾及20ml硫酸,稍摇匀后于管口放一小漏斗,置于恒温消解仪中,300℃左右,小心加热,一般2h内,管内容物可全部炭化,泡沫*停止。

  B.将温度降至240℃左右,分几次向管内共加10ml过氧化氢,提高温度至390℃左右,继续消化,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热30min,放冷后,定容100ml,混匀备用。

  C.取与处理样品相同的硫酸铜、硫酸钾、硫酸、过氧化氢按同一方法做试剂空白实验。

  本方法全部消化过程约需4-6h,一次zui多可消化16个样品。同时使用普通电炉进行蛋白质消解,进行比较实验。

  定氮测定:按国家标准[1]中GB5009.5-85食品中蛋白质的测定方法(4.3)微量定氮法进行操作。

  结果及讨论

  样品的用量:根据不同的蛋白质含量,取0.2g-2.0g样品,置消化管内进行消解,在300℃初始消解无外溢现象。样品先加酸放置过夜,可加快消解速度。

  开始消解时,由于消解温度恒定,消解管整体受热均匀,一般泡沫不能溢出管外,较直接电炉消解容易控制。

  消解温度:初始消解时温度不可过低,过低造成消化时间延长。实验证明初始消解温度300℃为宜。只要消解管内无泡沫产生,应及时把温度提高到390℃左右,以加快消解速度。

  恒温消解仪在蛋白质测定中,有效提高了样品消解的速度,进而也提高了蛋白质测定的速度。

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